Reconstituer un peptide lyophilisé : méthode et calcul de concentration
Matériel, étapes, erreurs à éviter et tableau de concentrations : comment remettre en solution une poudre de peptide lyophilisée au laboratoire.
Publié le · Équipe Lima Peptides
Un peptide de recherche est livré sous forme de poudre lyophilisée. Pour l'utiliser dans une expérience, il faut le remettre en solution avec un solvant adapté : c'est la reconstitution. Bien faite, elle préserve la molécule et permet de connaître précisément la concentration obtenue.
Le matériel nécessaire
- La fiole de peptide lyophilisé, sortie du congélateur 15 à 20 minutes avant pour revenir à température ambiante (évite la condensation à l'intérieur).
- Un solvant stérile : le plus souvent de l'eau bactériostatique (voir eau bactériostatique ou eau stérile).
- Des seringues ou une micropipette stériles pour mesurer le volume.
- Des tampons imbibés d'alcool pour désinfecter les bouchons.
Notre Kit Complet réunit l'eau bactériostatique 10 ml, les seringues et les tampons ; des seringues de 1 ml sont aussi vendues par 10.
Les étapes de la reconstitution
- Retirez la capsule plastique des deux fioles et désinfectez chaque bouchon avec un tampon alcoolisé. Laissez sécher.
- Prélevez le volume de solvant choisi (voir le tableau plus bas).
- Injectez le solvant lentement, en le faisant couler le long de la paroi de la fiole, jamais directement sur la poudre.
- Ne secouez pas. Faites tourner doucement la fiole entre vos doigts, ou laissez-la reposer quelques minutes : la poudre se dissout d'elle-même.
- Vérifiez que la solution est limpide et sans particules. Une solution trouble ou avec des dépôts ne doit pas être utilisée.
- Étiquetez la fiole : nom, concentration, date de reconstitution.
- Conservez-la au réfrigérateur (2–8 °C), à l'abri de la lumière (voir conservation des peptides).
Calculer la concentration
La formule est simple :
Plus on ajoute de solvant, plus la solution est diluée — mais la quantité totale de peptide reste la même. Exemples courants :
| Fiole | Solvant ajouté | Concentration | Peptide dans 0,1 ml |
|---|---|---|---|
| 5 mg | 1 ml | 5 mg/ml | 0,5 mg |
| 5 mg | 2 ml | 2,5 mg/ml | 0,25 mg |
| 10 mg | 1 ml | 10 mg/ml | 1 mg |
| 10 mg | 2 ml | 5 mg/ml | 0,5 mg |
| 10 mg | 3 ml | 3,33 mg/ml | 0,33 mg |
| 50 mg | 5 ml | 10 mg/ml | 1 mg |
Pour obtenir une quantité donnée : volume à prélever (ml) = quantité voulue (mg) ÷ concentration (mg/ml).
Les erreurs les plus fréquentes
- Secouer la fiole : l'agitation forte peut dénaturer ou faire agréger certains peptides et crée de la mousse.
- Viser la poudre avec le jet : même problème, localement.
- Ouvrir une fiole froide : l'humidité condense sur la poudre.
- Oublier d'étiqueter : impossible ensuite de retrouver la concentration.
- Congeler et décongeler plusieurs fois la solution : préférez des aliquotes.
Et si le peptide ne se dissout pas ?
La plupart des peptides courants se dissolvent dans l'eau. Certaines séquences très hydrophobes demandent un solvant particulier (acide acétique dilué, DMSO…) : reportez-vous alors à la littérature propre à la molécule. Patience d'abord : une poudre compacte peut mettre plusieurs minutes à se dissoudre sans agitation.
Questions fréquentes
- Quelle quantité d'eau mettre dans une fiole de 10 mg ?
- Il n'y a pas de volume unique : c'est la concentration voulue qui décide. Avec 1 ml on obtient 10 mg/ml, avec 2 ml 5 mg/ml, avec 3 ml environ 3,33 mg/ml.
- Faut-il secouer la fiole pour dissoudre le peptide ?
- Non. Il faut faire couler le solvant le long de la paroi puis faire tourner doucement la fiole ou la laisser reposer. Secouer peut dégrader certains peptides.
- Combien de temps se conserve un peptide reconstitué ?
- Au réfrigérateur (2 à 8 °C) et à l'abri de la lumière, généralement quelques semaines selon la molécule. Pour une conservation plus longue, on congèle des aliquotes.
Produits cités dans cet article
Kit Complet — 9,99 € — en stock
1 - Eau bac 10ml 5- Seringue Montées 5- Tampon désinfectant
10 seringues — 1 ml — 5,00 € — en stock
Lot de 10 seringues stériles de 1 ml à usage unique, graduées, avec aiguille protégée par un capuchon.
R3tatrutide — 10 mg — 45,00 € — en stock
Peptide synthétique de 39 acides aminés, agoniste expérimental des récepteurs GIP, GLP-1 et du glucagon. Utilisé en recherche préclinique pour l'étude des voies de signalisation métaboliques et de…